丹参酮Ⅱ A对肝癌细胞MHCC97-H Smad3/Smad7蛋白及上皮间质转化的影响

摘要：目的:探讨丹参酮Ⅱ A对肝癌细胞MHCC97-H Smad3、Smad7蛋白及上皮间质转移标志蛋白E-cadherin/N-cadherin表达水平及侵袭转移能力的影响.方法:10 μM丹参酮Ⅱ A处理MHCC97-H细胞,实时定量PCR检测细检测Smad3、Smad7和snail的mRNA表达;用不同浓度丹参酮Ⅱ A及10％小牛血清对照组培养肝癌细胞MHCC97-H,48h后,Western blot检测Smad3、p-Smad3、Smad7、Snail、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达水平.划痕法和Transwell小室检测肝癌细胞侵袭/迁移能力.结果:10 μM丹参酮Ⅱ A处理MHCC97-H细胞,不同时间点检测Smad3、Smad7和snail的mRNA表达:结果显示,与0h相比,48 h及72 hSmad7的表达量明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);Smad3及snail的差异无统计学意义.不同浓度丹参酮Ⅱ A处理MHCC97-H细胞48 h,Western blot检测Smad3、p-Smad3、Smad7、snail、E-cadherin、EpCAm、N-cadherin和Vimentin蛋白表达:结果显示,与对照组相比,高浓度丹参酮Ⅱ A组(20 μM)48 h的p-Smad3、Snail和N-cadherin、Vimentin明显降低,Smad7、E-cadherin和EpCAM明显升高(P＜0.05).中浓度丹参酮Ⅱ A组(10 μM)48 h的Smad7、E-cadherin和EpCAM升高;p-Smad3、snail、N-cadherin和Vimentin降低(P＜0.05).低浓度丹参酮Ⅱ A组(5μM)48 h的E-cadherin升高,N-cadherin降低(P＜0.05);而Smad3、p-Smad3及snail的结果与对照组无明显差异(P＞0.05).不同浓度的丹参酮Ⅱ A组和对照组(DMSO)Smad3的蛋白表达无影响.不同浓度的丹参酮Ⅱ A组均可以减少p-Smad3和增加E-cadherin的表达,且随着丹参酮Ⅱ A浓度增高p-Smad3的表达逐渐减少,E-cadherin的表达逐渐增加.划痕法结果显示,与对照组比较,24h后中浓度和高浓度丹参酮Ⅱ A组肝癌细胞的划痕愈合较慢,差异均有统计学意义(P＜0.05);48 h后中浓度和高浓度丹参酮Ⅱ A组与对照组相比,肝癌细胞的划痕愈合明显减慢,差异有统计学意义(P＜0.01);且同等浓度丹参酮Ⅱ A组肝癌细胞的划痕愈合与24h相比较,48 h肝癌细胞的划痕愈合减慢.transwell显示,与对照组相比,中浓度和高浓度丹参酮Ⅱ A处理细胞48 h可明显减少细胞的侵袭,差异有统计学意义(P＜0.05).而低浓度丹参酮Ⅱ A无明显影响,差异无统计学意义.结论:丹参酮Ⅱ A能抑制肝癌细胞侵袭转移,可能与与抑制Smad3蛋白磷酸化、上调Smad7蛋白,并抑制上皮间质转化有关.